坊間對病毒分離的工作，有些誤解。

“分離”一詞讓人感覺病毒能從患者標(biāo)本中直接“挑揀”出來。但實(shí)際上，從病人身體上采集樣本中獲得滿足使用需求的病毒，不僅需要分離出病毒，還要讓它穩(wěn)定傳代。與其說是病毒分離，不如說是“馴服”。

在疫情最初，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所病原體鑒別實(shí)驗(yàn)室團(tuán)隊與時間賽跑，歷時5天5夜，完成了國家衛(wèi)生健康委交予的病原體平行檢測鑒別任務(wù)，并將病毒成功分離出來，獲得穩(wěn)定的病毒培養(yǎng)體系，支持圍繞病毒開展的一系列研究。

3月23日，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所病原體鑒別實(shí)驗(yàn)室副主任任麗麗接受科技日報采訪，講述作為“馴毒者”精打細(xì)算、前瞻部署的3個月。

讓病毒在實(shí)驗(yàn)室“活”起來，支撐后續(xù)科研

“病人的樣本來了之后，用1微升就沒1微升，它是不可再生的。但如果把里面的病毒分離出來、穩(wěn)定傳代，那么它就變‘活’了，就是可持續(xù)使用的資源?！比嘻慃愓f，疫情初期，實(shí)驗(yàn)室接到疑似患者的臨床樣本，有灌洗液、痰液、氣道刮取物等，團(tuán)隊的任務(wù)是從中鑒定并“馴服”病毒。

由于樣本的總量有限，需要進(jìn)行病原學(xué)分析等多種操作，每種試驗(yàn)方案都是以微升計來取用樣本，進(jìn)行病原學(xué)鑒定，分離出病毒是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，進(jìn)行后續(xù)病毒致病機(jī)制研究等必須要讓病毒能在實(shí)驗(yàn)室中“繁衍生息”。

“樣本到我們手上的時候，已經(jīng)過了幾次的反復(fù)凍融，對其中病毒顆粒的完整性影響較大。”任麗麗解釋，反復(fù)凍融之后病毒表面的突起蛋白會掉一些，這些突起如果缺失了，那么能進(jìn)到細(xì)胞里的效率就很低了，會影響病毒分離。

反復(fù)凍融使得讓新冠病毒的感染增殖并不容易，而它的高致病性又讓操作更多了一份危險?！氨仨氃谏锇踩?級實(shí)驗(yàn)室操作，考慮只能用微量樣本，我們專門用斜面管減少接種量，同時單管操作避免樣本相互間的交叉污染?！比嘻慃愓f，由于時間緊、樣本有限，綜合考慮生物安全風(fēng)險，實(shí)驗(yàn)室對相關(guān)應(yīng)急支撐工作儲備了很多解決方案。

“在國家傳染病科技重大專項和中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康科技創(chuàng)新工程項目支撐下，包括我們團(tuán)隊在內(nèi)的國內(nèi)優(yōu)秀團(tuán)隊多年積累，明確冠狀病毒對于哪些細(xì)胞系比較敏感，哪些培養(yǎng)體系更容易把病毒分離出來?！比嘻慃愓f，基于經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)的積累，團(tuán)隊很快獲得了“活”的病毒。

多年和呼吸道病毒打交道的經(jīng)驗(yàn)，讓團(tuán)隊對病毒復(fù)制有基本的判斷經(jīng)驗(yàn)，樣本接種細(xì)胞幾天后，細(xì)胞會呈現(xiàn)出病變效應(yīng)，這表明病毒已經(jīng)在細(xì)胞上開始復(fù)制，通俗的理解就是“養(yǎng)活了”，但病毒滴度（濃度）是否足夠后續(xù)的研究，還需要持續(xù)培養(yǎng)適應(yīng)和篩選。團(tuán)隊也探索多種培養(yǎng)體系，尋找最適宜病毒“生長”的體系。

“雖然很心急，但也要遵循科學(xué)規(guī)律，滴度很低的時候有傳代丟失的風(fēng)險。”任麗麗說。既是戰(zhàn)鼓雷雷，也要心靜如水，這是抗疫科研一線的共性感受。一方面疫情如戰(zhàn)情，戰(zhàn)鼓雷雷催促科研進(jìn)展，另一方面對病毒的研究按照復(fù)制特性、心靜如水尋求突破點(diǎn)。

終于，在夜以繼日的努力之后，任麗麗團(tuán)隊成功將病毒分離出來，為后續(xù)的研究，如藥物篩選、疫苗評價等工作提供了重要資源。

優(yōu)化病毒檢測方法，追蹤病毒變異

“我們的應(yīng)急支撐工作沒有結(jié)束，在防控形勢的不同時期有不同的問題要解決?！比嘻慃愓f，團(tuán)隊的科研任務(wù)并沒有因?yàn)橐咔榉揽匦蝿莸暮棉D(zhuǎn)而告一段落。

采集病人的咽拭子進(jìn)行核酸檢測是目前廣為使用的新冠病毒診斷方法。針對核酸咽拭子檢測可能受取樣、病程等多種因素的影響，可能影響檢測結(jié)果而發(fā)生漏診的問題，任麗麗所在的科研團(tuán)隊用半個月的時間，利用基因工程技術(shù)表達(dá)、純化出病毒抗原，并研制了血清抗體檢測試劑，其中化學(xué)發(fā)光法正在申請國家審批，用于輔助臨床診斷。

“我們正在研發(fā)抗原檢測方法?！比嘻慃愓f，目前還沒有這一原理的檢測方法獲批，它是直接檢測病毒的蛋白，希望能為病毒早期診斷提供便捷的方法。

現(xiàn)階段，疫情在多個國家蔓延，掌握病毒的突變特征是科研工作需要回答的另一個問題。“針對載量往往很低的樣本，必須要找到更高效、更快速的方法，更有效地獲得大量病毒基因組序列，這方面中國有很多科學(xué)家們正在努力。”任麗麗說，面對國際上快速蔓延的新冠疫情，希望通過對大量病毒的基因組分析掌握其變化態(tài)勢，為疫情防控提供科學(xué)依據(jù)。

推進(jìn)毒種標(biāo)準(zhǔn)化，新冠病毒成首個新入駐“保藏種”

由于我國在毒種保藏體系建設(shè)方面起步較晚，過去做病毒研究工作，毒種往往要從國外引進(jìn)。目前我國正在開展毒種保藏體系建設(shè)，這一工作正在加快步伐。

“在上級部門的支持下，我們目前正在和兄弟單位一起完善毒種的標(biāo)準(zhǔn)化工作?！比嘻慃惤忉?，首先要明確什么樣的毒種能夠進(jìn)入到保藏行列，而不是保存。其次，要求毒種保藏過程要遵循標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。

“國際學(xué)界公認(rèn)的保藏機(jī)構(gòu)會對毒種進(jìn)行細(xì)致的登記，就像‘戶口本’。上面寫清楚它是誰，基因組特點(diǎn)是什么，滴度如何，用何種培養(yǎng)體系?！比嘻慃愓f，這些方面需要權(quán)威團(tuán)隊的驗(yàn)證，進(jìn)而形成行業(yè)共識的指南和規(guī)范。

“新冠病毒是中國研究團(tuán)隊首先分離出來的，可以將其作為一個模板，完善標(biāo)準(zhǔn)化的過程。”任麗麗說，“毒種在庫里面留好之后，要定期復(fù)蘇、擴(kuò)增，保證它的滴度和活力，將來無論是企業(yè)還是科研，要用的話，能把它用起來，這就是保藏過程?！?

從管理規(guī)范化和病毒真正能用起來的角度，毒種標(biāo)準(zhǔn)化的進(jìn)程正在逐步的推進(jìn)，任麗麗所在團(tuán)隊也參與了這些規(guī)范文件的制定推廣工作。從規(guī)范新落地的角度而言，新冠病毒將成為新入駐的“保藏種”。

相較于最早分離出新冠病毒而言，任麗麗認(rèn)為我國毒種標(biāo)準(zhǔn)化意義更加重大，是“基石性”的工作，是基礎(chǔ)戰(zhàn)略儲備的工作。

（來源：科技日報）

（轉(zhuǎn)自院校新聞網(wǎng)）